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    關(guān)于BCA蛋白定量試劑盒說明書上的微型定量操作
    
            
    
              發(fā)布日期：
              2021-05-19
            
    
            
    
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             　　BCA蛋白定量試劑盒是一種靈敏并且抗干擾能力強(qiáng)的蛋白定量檢測(cè)試劑盒。本試劑盒方便快捷，加入待測(cè)樣品1小時(shí)即可進(jìn)行吸光度測(cè)定，對(duì)蛋白定量線性范圍在31.2-1000μg/ml之間，靈敏度≤31.2μg/ml。特別適合用于RIPA裂解液提取的細(xì)胞和組織蛋白樣品中的蛋白濃度測(cè)定。
    　　1. 吸取25ul標(biāo)樣或樣品分別加入到96孔板的各孔中。  
    　　2. 每孔加入200ul的BCA工作液。搖晃混勻30s，蓋住各樣品孔。  
    　　3. 標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)：：在37°C孵育30min或室溫放置2–16h。加強(qiáng)型檢測(cè)加強(qiáng)型檢測(cè)加強(qiáng)型檢測(cè)：：在60°C孵育15min。  
    　　4. 冷卻至室溫。  
    　　5. 在562nm吸光值。  
    　　注意：如果光度計(jì)沒有配備562nm濾波片，波長在540–590nm范圍的都可以使用。  
    　　6. 校正的吸光值是將各標(biāo)樣和試樣的讀數(shù)減去空白樣吸光值。
    　　7. 比照已知BSA量制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線讀取蛋白濃度。  
    　　注意：如果機(jī)器附帶提供標(biāo)準(zhǔn)曲線軟件可以幫助獲得精確的結(jié)果。  
    　　8. 參照標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)各蛋白試樣的校正吸光值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)讀出各樣品的蛋白濃度。  9. 根據(jù)樣品體積和稀釋度計(jì)算原來樣品中的蛋白量。
    　　標(biāo)準(zhǔn)型定量需要的蛋白樣品較多（50ul），這種情況下BCA工作液與蛋白樣品的體積比是20:1，干擾定量的物質(zhì)的影響會(huì)較??；微型定量需要的蛋白樣品量較少（25ul），非常適合96孔板式的高通量操作。此種情況下BCA工作液與蛋白樣品的體積比是8:1，干擾定量的物質(zhì)的影響相對(duì)會(huì)較大。